Среда ЭКО1 "Универсальная" с феноловым красным, без антибиотиков, 10 мл

Среда ЭКО 1 «Универсальная» предназ­начена для проведения фертилизации. Может быть использована для кратковременного культивирования эмбрионов на ранней стадии развития. Среда пригодна также для прове­дения процедуры ИКСИ.

Среда ЭКО 1 «Универсальная» используется во вспомогательных репродуктивных техно­логиях, предназначена к применению в лечебно-профилактических и научно-иссле­довательских учреждения.

Данный продукт имеет Регистрационное Удостоверение.

ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ИЗДЕЛИЯ

Среда ЭКО 1 «Универсальная» приготовлена на основе бикарбонатного буфера. В состав среды входит вода очищенная, соли Эрла, глюкоза, лактат, пируват, аминокислоты, человеческий сывороточный альбумин. Альбумин протестирован на наличие поверхностного антигена гепатита В, на антитела к вирусам гепатита С, ВИЧ-1 ВИЧ-2, на антитела к возбудителю сифилиса.

Среда ЭКО 1 «Универсальная» может быть приго­товлена как с добавлением антибиотиков и красителя фенолового красного, так и без этих компонентов (по желанию заказчика). Среда ЭКО 1 «Универсальная» простерилизована методом мембранной фильтрации.

ПРОТОКОЛ ПРИМЕНЕНИЯ

Для проведения фертилизации и кратковре­менного культивирования эмбрионов рекомен­дуется следующий протокол:

1. Перед использованием приоткрытый флакон со средой выдерживают в атмосфере 5-6% СО₂при температуре 37 °С в течение 2 ч.

2. Для успешного проведения фертилизации требуется использовать сперматозоиды в оптимальной концентрации: 80 000 -100 000 подвижных сперматозоидов в 1 мл среды.

3. Ооцит-кумулюсные комплексы после отмывки в среде ЭКО 1 «Ооклин» помещают в среду ЭКО 1 «Универсальная» и инкубируют в ней в течение 3-4 ч.

4. По истечении этого времени в капли со сре­дой, в которых содержатся ооцит-кумулюсные комплексы, вносят рассчитанный объем отмы­тых сперматозоидов до конечной концентрации в среде 80000-100000 подвижных сперма­то­зоидов в 1 мл среды.

5. Сразу после внесения сперматозоидов планшет переносят в СО₂-инкубатор.

6. Через 16 -20 ч ооциты осторожно промывают, перенося через несколько капель с уравновешенной средой ЭКО 1 «Универсальная». Затем проверяют форми­ро­вание пронуклеусов в зиготах, после чего нормально сформировавшиеся зиготы осторожно промывают и переносят в среду для культивирования эмбрионов (ЭКО ПРО «Дробление» или в новую порцию среды ЭКО 1 «Универсальная»).

7. Культивирование в среде ЭКО 1 «Универсальная» можно проводить до стадии двух бластомеров, затем эмбрионы следует поместить в среду для последующего культивирования до стадии 4-8 бластомеров (ЭКО ПРО «Дробление»).

8. Фертилизацию и культивирование можно проводить в микрокаплях среды, покрытых жидким парафиновым маслом, либо в лунках со средой объемом 500 мкл без покрытия среды маслом.

Для использования среды при проведении процедуры ИКСИ рекомендуется следующий протокол:

1. Перед использованием приоткрытый флакон со средой выдержать в атмосфере 5-6% СО₂при температуре 37 °С в течение 2 ч.

2. Ооцит-кумулюсные комплексы после отмывки в среде ЭКО 1 «Ооклин» помещают в среду ЭКО 1 «Универсальная». Инкубация в среде ЭКО 1 «Универсальная» должна прово­диться в течение 3-4 ч.

3. Затем проводят освобождение ооцитов от кумулюсных клеток с помощью кратко­временного выдерживания в среде ЭКО 1 «Гиаза» и последующей денудации ооцитов в среде ЭКО 1 «Универсальная».

4. После проведения денудации и перед проведением инъекции сперматозоида ооциты должны быть выдержаны в СО₂-инкубаторе в среде ЭКО 1 «Универсальная» в течение небольшого промежутка времени.

5. Процедуру инъекции сперматозоида проводят в чашках Петри. В середину чашки вносят каплю среды ЭКО 1 «ПВП». В эту же чашку помещают капли среды ЭКО 1 «Универсальная», в которой будут проводиться инъекции. Количество этих капель соответствует количеству ооцитов.

6. Все капли должны быть покрыты слоем жидкого парафинового масла, предварительно выдержанного в атмосфере 5-6% СО₂при температуре 37 °С в течение 12 ч.

7. Чашку с покрытыми маслом каплями среды рекомендуется оставить на некоторое время в СО₂-инкубаторе, чтобы рН среды и температура вернулись к необходимым значениям.

8. Подготовленные сперматозоиды помещают в центральную каплю. В периферические капли вносят ооциты.

9. Проводят фиксацию одного сперматозоида с помощью инъекционной микропипетки. Инъекцию сперматозоида рекомендуется проводить в минимальном объеме среды ЭКО 1 «ПВП».

10. Затем проводят фиксацию ооцита с помощью холдинг-пипетки. Важно зафиксировать ооцит таким образом, чтобы полярное тельце находилось в позиции на 6 или на 12 ч.

11. Инъекционную микропипетку вводят в ооцит в положении на 3 ч. Для подтверждения прокола блестящей оболочки рекомендуется аспирировать часть цитоплазмы.

12. Если пипетка проникла внутрь цитоплазмы, то сперматозоид с частью аспирированной цитоплазмы вводят внутрь ооцита.

13. После введения сперматозоида подают давление в холдинг-пипетке и ооцит отсоединяется.

14. После проведения инъекции ооциты промы­вают и инкубируют в уравновешенной среде ЭКО ПРО «Дробление» или ЭКО1 «Универсальная».

15. С момента инъекции должно пройти 16-18 ч, после чего проверяют формирование пронуклеусов в ооцитах. Дальнейшее культивирование проводят в тех же средах.

16. Культивирование можно проводить до стадии двух бластомеров в среде ЭКО 1 «Универсальная», затем эмбрионы следует поместить в среду ЭКО ПРО «Дробление» для последующего культивирования до стадии 4-8 бластомеров, либо перенести в полость матки для имплантации в среде ЭКО ПРО «Швартовая».

СРОК ГОДНОСТИ, УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ

Срок годности среды – 3 месяца со дня изготов­ления при условии соблюдения режима хранения.

Хранить и транспортировать в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 °С в защи­щенном от света месте.

Не замораживать!

Неиспользованный остаток нагретой среды, не подлежит повторному нагреванию и исполь­зованию.

Продукт должен быть использован в течение 7 дней с момента первого вскрытия флакона.

Рекомендуется хранить среду с минимальным объёмом воздуха во флаконе.

Вскрытие флакона должно производиться в стерильных условиях.